一、细胞培养条件

细胞名称：RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议1:2传代

备注：在2天内更换培养基，如对比培养效果不理想，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞接收后处理

细胞状态良好时，加入完全培养液并密封瓶口是运输过程中最有效的方式。收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净工作台进行无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数的照片（建议记录40x, 100x, 200x的各一张），前三天的照片为重要的售后依据。如未提供照片，则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将完全培养液收集到离心管中，保留5毫升完全培养基，然后放入37℃、5% CO2孵箱培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
添加1-2毫升消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察消化情况。如大部分细胞变圆脱落，轻敲培养瓶后迅速加入5毫升以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15毫升离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2毫升完全培养基重悬。
按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8毫升/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗。
添加约1毫升的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入5毫升完全培养液终止消化，并轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15毫升离心管，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1毫升尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移到冻存管中。
将冻存管直接放入-80℃冷冻箱中，若后期需要转入液氮罐，则需在-80℃存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（佩戴防护装备），快速置于37℃水浴解冻，直至无结晶后，用75%酒精消毒冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5毫升完全培养基的15毫升离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，使用5毫升完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。处理方法为：将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清用于过渡培养，沉淀后加入1-2毫升胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再加入5毫升完全培养基终止反应。然后再次离心，弃去上清，补充1-2毫升完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8毫升/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

尊龙凯时的细胞如出现问题，重发的情况包括：

细胞在运输过程中丢失、瓶体破损、严重漏液等情况。
在收到产品48小时内，提供真实实验结果的细胞污染问题，经核实后可重发。
常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）可重发。
出现污染的情况需在复苏后24小时内或常温发货后静置4小时并未开封的情况下，可重发。
细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，以台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
收到细胞当天及第2、3天需拍照，如3天内未告知则视为产品合格。
若在4-7天内出现问题并提供收到细胞前三天的照片及相关操作步骤，技术人员可根据情况确定重发责任。

不予重发的情况包括：

客户造成的细胞污染。
因不正确操作导致细胞状态不佳。
非尊龙凯时推荐的培养体系导致的细胞不良状态。
未提供细胞培养前三天的照片。
细胞培养过程中的其他处理情况。
收到细胞后2天内未告知的情况。
其他视具体情况而定。